基于近年欧盟2008年6月1日REACH法规分阶段化学物质预注册的实施，美、日等国一直推动对化妆品成品、原料及化学品禁止通过动物实验进行毒理学安全性评价等活动的开展，化妆品盥洗用品和香料协会（COLIPA）于2008年5月14日至5月16日在瑞士卢塞恩举行年会及科学研讨会，交流的主题包括：REACH法规实施、眼刺激替代试验的进展、毒理学试验的质量控制、化妆品、香料工业革新、美日化妆品等热点问题，得到了欧盟、美、日、俄、中等18个国家化妆品、盥洗用品、香料企业、协会和政府官员的极大关注和积极参与。我国浙江监督中心朱红研究员、广东省疾病预防控制中心杨颖副主任医师参会，通过本次会议加强了与国际同行间的交流，及时了解了欧盟REACH法规实施、动物替代试验的进展、国际化妆品行业发展和管理等热点问题的发展动态。会议期间与来自COLIPA协会秘书长、宝洁、欧莱雅等跨国公司国际事务负责人及同行专家进行了交流和讨论，并对双方共同感兴趣及将来可合作的领域进行了探讨，收获良多。

    此次会议主要内容与我中心工作相关的主要包括REACH法规中化学品预注册细则和眼刺激替代试验的进展，现介绍如下：
　  1. REACH法规中化学品预注册细则　　　

    REACH是2006年12月18日欧盟议会和欧盟理事会正式共同通过的化学品新政策的法规草案《关 于化学品注册、评估、许可和限制制度》（Concerning the Registration, Evaluation, Authorization and Restriction of Chemicals），简称REACH法规［1907／2006（EC）］。2006年12月提出，2007 年6月 REACH生效，2008年6月 欧洲化学品管理局正式运行，承担REACH在欧盟的技术和管理工作，开始实施欧盟REACH法规的预注册， 6月1日到12月1日为分阶段物质的预注册，如果不在规定期限内完成预注册，企业从2009年1月1日开始就不能出口产品到欧盟，完成预注册的企业将可以享受3年半、6年、11年不等的注册过渡期。在此期间，进出口都可照常进行，原有的市场份额、业务的连续性都不会受到破坏，同时企业还可从容不迫地准备注册材料。如果制造商或进口商未能按规定提交完整的资料，则注册失败，该化学物质就不能被制造或进口，含该化学物质的物品也将不能被制造或者进口。 

    注册主要目的是要求企业（制造商或进口商）对其产品安全承担责任，收集关于化学品危害性的充分信息，并用于决定适当的供制造商和进口商执行的风险管理措施及向下游用户推荐这些措施。注册人必须是欧盟范围内的企业法人。

    预注册要求提交的数据资料主要包括：（1）化学物质的名称，包括EINECS号、CAS号或其他鉴别代码；（2）预注册人的姓名、地址和联系人的姓名，或代表人的姓名、地址；（3）登记的吨级数量范围及预注册截止期限。

    预注册时间期限：
    ⑴在法规生效12－18个月内：注册人须对生产或进口量大于等于1吨／年的分阶段物质进行预注册，除非有特殊的注册要求。
    ⑵潜在注册者在法规生效18个月后第一次生产或进口1吨以上的物质，需要在生产前6个月并在注册截止时间前12个月提出预注册。欧洲化学品管理局将在法规生效后的第19个月，公布预注册物质的名录。

   （3）2010年11月 1000吨及上产量的物质(CMR 1、 2 类)注册截止期
   （4）2013年6月 100吨及上产量的物质(CMR 1、 2 类)注册截止期
   （5）2018年6月 1 吨及上产量的物质(CMR 1 、2 类)注册截止期
    截止期前可以自愿注册，自2008年6月起就可以提交注册文档。新物质上市流通前必须注册，其注册日期自2008年6月1日开始。

   欧洲化学品管理局将在2008年10月前公布第一份候选物质授权列表，对于这份物质名单ECHA将在随后应用相关程序，选取包含在附件XIV列表中的授权物质生成第一份推荐物质列表，并在2009年1月? 4月提交公众讨论，最终在2009年6月1日之前正式确定并递交给欧洲委员会。

   2. 眼刺激替代试验的进展　  

   多年来,科学家们一直进行眼刺激替代试验方法的研究, 现已建立离体器官、鸡胚体外循环和细胞毒性及蛋白质变性等多种方法，1987-1997年有3-4个方法已进入欧盟ECVAM验证阶段，但至今尚没有任何体外方法经验证评估认为可以完全替代动物眼刺激性试验。在动物试验中,至少要对角膜、结膜及虹膜三种组织的病理反应进行观察并进行评分,通过一种简单的体外方法来模拟所有眼损伤事件的可能性非常小,所以可将反应机制与检测终点互补的若干个体外试验联合起来同步测试,但是验证所有的联合测试方法尚不可能。人们希望修正后的眼刺激方法是机制型的能能可靠预测人眼的暴露情况并能替代单位试验。

    COLIPA的动物替代委员会（SCAAT）现正致力于（1）进行体外角膜细胞的培养或离体器官模型，判断经化学物损伤后的角膜细胞的生理功能的变化及化学物移除后的恢复情况；（2）正确选择与人工角膜的损伤和修复的相关指标；（3）加强与ECVAM的合作，促进眼刺激性替代动物试验的验证进程。

    目前离体器官模型目前开展的主要有离体鸡眼试验(chicken enucleated eye tes,t CEET)、离体兔眼试验( isolated rabbit eye tes,t IRE)、牛角膜混浊与渗透力(bovine cornealopacity and permeabili-ty,BCOP)影响试验等。此模型主要通过测定受试物对角膜水肿、角膜混浊或荧光素滞留程度等变化的影响来预测物质的眼刺激性。目前欧洲委员会/英国内务府,美国化妆品、个人护理用品和香水协会及美国机构间替代方法管理小组均对IRE、CEET、BCOP几种替代方法进行了研究,发现这几种方法单独应用时虽然不能很好地预测所有受试物的刺激性,但在区分刺激性严重的受试物时,它们均与动物试验表现出良好的相关性。

    细胞毒性试验通过检测培养细胞对染料或其代谢产物的摄取、还原、排斥、释放及炎性介质漏出等变化,以反映受试物对细胞结构及存活力的影响。所用细胞株有小鼠成纤维细胞(BALBc/3T3)、兔眼角膜细胞(SIRC)、中国仓鼠肺细胞(CHL)、人类正常上皮角朊细胞(normal human epi-dermalkeratinocyte,NHEK)及Hela细胞等，可模拟受试物对角膜上皮通透屏障功能(紧密连接/桥粒、胞膜完整性)的影响,适合筛选表面活性剂及醇类物质,并能区分无刺激性物质和严重的刺激性物质,可以较好地预测角膜和虹膜的反应。

    人工角膜刺激性试验作为筛选方法替代眼刺激性试验是一种有希望的眼刺激性物质的筛选方法，检测结果与动物试验结果具有良好的相关性。近年来COLIPA致力于利用人类角膜细胞建立三维模型进行眼刺激的检测，发现其结果由于其他方法。目前已建立有两种人工角膜模型（SkinEthic Human Corneal Epithelium，HCE，MatTek EpiOcular^TM model）的眼刺激检测方法，并于2005年提交ECVAM进行正式验证。

                                                                  广东省疾病预防控制中心毒理所

                                                                           杨颖

                                                                        2008.11.30